Low-protein diet disrupts the crosstalk between the PKA and PKC signaling pathways in isolated pancreatic islets.

Protein restriction in the early stages of life can result in several changes in pancreatic function. These alterations include documented reductions in insulin secretion and in cytoplasmic calcium concentration [Ca(2+)]i. However, the mechanisms underlying these changes have not been completely elucidated and may result, in part, from alterations in signaling pathways that potentiate insulin secretion in the presence of glucose. Our findings suggest that protein restriction disrupts the insulin secretory synergism between Cyclic adenosine monophosphate (cAMP)-dependent protein kinase (PKA) and Ca(2+)-dependent protein kinase C (PKC) in isolated islets. Western blot analysis demonstrated reduced levels of both phospho-cAMP response element-binding protein (phospho-CREB) at Ser-133 and substrates phosphorylated by PKCs (Phospho-(Ser) PKC substrate), suggesting that PKA and PKC activity was impaired in islets from rats fed a low-protein diet (LP). cAMP levels and global Ca(2+) entry were also reduced in LP islets. In summary, our findings showed that protein restriction altered the crosstalk between PKA and PKC signaling pathways, resulting in the alteration of secretory synergism in isolated islets.

Inhibitory action of in vitro ethanol and acetaldehyde exposure on LHRH and phorbol ester stimulated testerone secretion by rat testicular interstitial cells

Ha sido demostrado que el etanol y el acetaldehido inhiben la esteroidogenesis testicular. No obstante el (los) mecanismo(s) de trasnducción de señal envuelto en su acción no fue aún elucidado. Hemos examinado el posible envolvimiento de la proteína quinasa sensible a fosfolípidos y dependiente de calcio (proteína quinasa C, PK-C) en el mecanismo intracelular de acción de etanol y de acetaldehido, estimulando la producción de testosterona en células intersticiales de testículo de rata con LHRH y éster de forbolPDBu, los cuales activan la PK-C a nivel de receptor (LHRH) y pos-receptor (PDBu). El etanol(2000 mg por ciento) inhibió la producción de testosterona estimulada con 10**-7 M LHRH y 200 nM PDBu en 81 + 4,7 por ciento y 60 + 20.4 por ciento respectivamente. El acetaldehido (20 mg por ciento) redujo la cantidad de testosterona producida por 10**-7 M LHRH y 200 nM PDBu en 59,4 + 1,2 por ciento, respectivamente. El nivel basal de testosterona no fue modificado por el etanol pero si fue reducido por el acetaldehido. No obstante, la prueba funcional de la viabilidad celular a través de la preincubación de las células con las referidas dosis de etanol y acetaldehido no disminuyó la capacidad de respuesta a una subsecuente estimulación con LHRH, demostrando que la viabilidad celular no fue afectada por la incubación con esas substancias. Los resultados aquí presentados sugieren que la exposición directa al etanol y acetaldehido redujo la habilidad de las células intersticiales del testículo de rata de responder a la estimulación de la vía mediada por la PK-C

Inhibitory action of in vitro ethanol and acetaldehyde exposure on LHRH and phorbol ester stimulated testerone secretion by rat testicular interstitial cells

Ha sido demostrado que el etanol y el acetaldehido inhiben la esteroidogenesis testicular. No obstante el (los) mecanismo(s) de trasnducción de señal envuelto en su acción no fue aún elucidado. Hemos examinado el posible envolvimiento de la proteína quinasa sensible a fosfolípidos y dependiente de calcio (proteína quinasa C, PK-C) en el mecanismo intracelular de acción de etanol y de acetaldehido, estimulando la producción de testosterona en células intersticiales de testículo de rata con LHRH y éster de forbolPDBu, los cuales activan la PK-C a nivel de receptor (LHRH) y pos-receptor (PDBu). El etanol(2000 mg por ciento) inhibió la producción de testosterona estimulada con 10**-7 M LHRH y 200 nM PDBu en 81 + 4,7 por ciento y 60 + 20.4 por ciento respectivamente. El acetaldehido (20 mg por ciento) redujo la cantidad de testosterona producida por 10**-7 M LHRH y 200 nM PDBu en 59,4 + 1,2 por ciento, respectivamente. El nivel basal de testosterona no fue modificado por el etanol pero si fue reducido por el acetaldehido. No obstante, la prueba funcional de la viabilidad celular a través de la preincubación de las células con las referidas dosis de etanol y acetaldehido no disminuyó la capacidad de respuesta a una subsecuente estimulación con LHRH, demostrando que la viabilidad celular no fue afectada por la incubación con esas substancias. Los resultados aquí presentados sugieren que la exposición directa al etanol y acetaldehido redujo la habilidad de las células intersticiales del testículo de rata de responder a la estimulación de la vía mediada por la PK-C (AU)

Fluoride and phosphatidylserine induced inhibition of cytosolic insulin-degrading activity

Cytosol (C) (100,000 x g/60 min, supernatant) from liver, brain and testis (Wistar male rats) are shown to contain insulin degrading activity (C-IDA). The regulation of C-IDA in these fractions by ligands that activate G protein and PKC were examined C-IDA from liver, brain and testis was inhibited 76%; 64% and 50% by 50 mM F- respectively. Chromatography of C fraction from liver on Sephadex G-50 in presence of 1 M (NH4)2SO4 and 20% (v/v) glycerol (experimental condition to remove guanine nucleotides from G proteins) decreased in about 3-fold aluminum fluoride effect on C-IDA. Mg++ (from 5mM to 10 mM) enhanced fluoride effects by inhibiting fully C-IDA. Phosphatidylserine in presence of ATP completely inhibited C-IDA; this inhibition was 31.3% mediated by a phosphorylation reaction. It is concluded that cytosol from different tissues contain proteins capable to associate ligands as aluminum fluoride and PS to regulate C-IDA. It is proposed a mechanism of protein-protein interaction to modulate C-IDA (Au)

Fluoride and phosphatidylserine induced inhibition of cytosolic insulin-degrading activity

Cytosol (C) (100,000 x g/60 min, supernatant) from liver, brain and testis (Wistar male rats) are shown to contain insulin degrading activity (C-IDA). The regulation of C-IDA in these fractions by ligands that activate G protein and PKC were examined C-IDA from liver, brain and testis was inhibited 76%; 64% and 50% by 50 mM F- respectively. Chromatography of C fraction from liver on Sephadex G-50 in presence of 1 M (NH4)2SO4 and 20% (v/v) glycerol (experimental condition to remove guanine nucleotides from G proteins) decreased in about 3-fold aluminum fluoride effect on C-IDA. Mg++ (from 5mM to 10 mM) enhanced fluoride effects by inhibiting fully C-IDA. Phosphatidylserine in presence of ATP completely inhibited C-IDA; this inhibition was 31.3% mediated by a phosphorylation reaction. It is concluded that cytosol from different tissues contain proteins capable to associate ligands as aluminum fluoride and PS to regulate C-IDA. It is proposed a mechanism of protein-protein interaction to modulate C-IDA